琥珀酸脱氢酶是连接氧化磷酸化与电子传递的枢纽之一,可为真核细胞线粒体和多种原核细胞需氧和产能的呼吸链提供电子,其活性一般可作为评价三羧酸循环运行程度的指标。 该酶以FAD作为其脱下电子的受体,而不是NAD+。琥珀酸脱氢酶与FAD的关系是以共价键相互连接,因此它是酶和辅基的关系。很特别,因为一般FAD与酶以非共价键形式结合。尽管琥珀酸脱氢酶的作用是专一的,但丙二酸(与底物结构上很相似)可以与该酶结合,但酶不能催化其脱氢,因此丙二酸是琥珀酸的强抑制剂。琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸的脱氢具有严格的立体专一性。
琥珀酸脱氢酶怎么提取?
琥珀酸脱氢酶存在于所有有氧呼吸细胞,和线粒体膜牢固结合,是三羧酸循环中唯一与内膜结合的酶,是脱氢酶中最重要的酶。迄今为止,已从多种原核和真核组织中分离纯化出这种酶,为该酶的酶学研究奠定了基础。作为膜内酶,琥珀酸脱氢酶与具有脂双层结构的线粒体膜结合得比较紧密,很难溶解下来,而且其一旦离开膜后,暴露在空气中会很快失活,因此其提纯难度很大。1950年我国著名生物化学家王应睐、邹承鲁、汪静英等开展对膜蛋白琥珀酸脱氢酶的研究,经过反复实验最后以正丁醇抽提法成功地把琥珀酸脱氢酶从鼠肝组织线粒体膜上溶解下来,得到了高纯度的水溶性琥珀酸脱氢酶,其活力比同期国外报道者高出1倍以上,从而奠定了我国在琥珀酸脱氢酶研究领域的领先地位。其后,Davis等(1971、1977)使用NaClO4从牛心线粒体溶解下此酶;TsukahoHattori和TadashiAsahi(1982)选用离子型去垢剂脱氧胆酸钠从番薯根线粒体提取SDH;Suraveratum等(2000)对恶性疟原虫的琥珀酸脱氢酶进行了纯化;夏玉凤等(2000)以玉米黄化苗为生物材料,通过差速离心获得线粒体,使用超声波将其破碎,用2%TritonX-100溶膜,超速离心,硫酸铵沉淀,DEAE-C32层析纯化琥珀酸脱氢酶;辛明秀等(2004)用常规酶学方法从嗜冷酵母(Y18)中分离纯化出有催化活性的琥珀酸脱氢酶。
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